紫外可見分光光度計可達到檢測質(zhì)量與成分的目的。在對不同的儀器進行分析時,紫外可見光光度計是常規(guī)的分析儀 器之一,原理就是紫外可見光度法。紫外可見光光度計有很多的特點:如,由于選擇性好而且靈敏度較高,維護管理很 方便,所以在使用中更為常見;第二,它的結(jié)構(gòu)較為簡單,可以很方便地進行操作而且在成本上又不是非常貴。以光路設(shè)計 為基礎(chǔ),對紫外可見分光光度計進行分類,可以依據(jù)光路設(shè)計分為三種類型:單光束分光光度計、雙光束分光光度計以及雙 波長分光光度計。鑒于此,本文主要分析紫外可見分光光度計主要技術(shù)指標及其檢定方法。
1.紫外-可見分光光度法工作原理以及相關(guān)應(yīng)用
紫外可見分光光度法的工作原理就是利用不同物質(zhì)的 分子在紫外可見光譜區(qū)上的輻射吸收的不同,利用分子的這 一特性來進行有效地區(qū)分辨別。紫外可見分光光度法在物質(zhì) 的定性定量分析以及物質(zhì)純度分析物質(zhì)結(jié)構(gòu)分析等多種方 面都有著廣泛的應(yīng)用,起著*的作用。例如:此種檢 測方法在食品行業(yè)中的運用,可以對食品的質(zhì)量進行有效地 安全監(jiān)測。而對于生活質(zhì)量方面來說,食品衛(wèi)生及質(zhì)量是 為重要的一點,只有確保食品不會出現(xiàn)安全問題,才能夠有 效地促進國民健康生活?,F(xiàn)階段,我國出現(xiàn)的食品安全問題 有以下幾種:食品造假;在食品添加對人體有害的添加劑; 一些非法添加物的濫用;除了這些主要問題之外還存在食品 殘留農(nóng)(獸)藥、微生物或者重金屬等有害物質(zhì)的情況,以 上情況都會造成食品出現(xiàn)質(zhì)量安全問題,因此必須對食品進 行安全分析、檢測,確保食品不會出現(xiàn)質(zhì)量安全問題。
2.紫外可見分光光度計主要技術(shù)指標
2.1波長準確度及其檢定方法
波長的實際測定值和理論值相減,就是紫外可見分光光 度計的波長的準確度。它在測試不同的儀器時,作用非常大, 是非常關(guān)鍵的技術(shù)指標。在我國,計量檢定工作,波長準確 度是很重要的。檢定紫外可見分光光度計的波長準確度有很 多的方式,下面將通過兩種方法進行壽命說明:汞燈和氖燈 的利用。
汞燈
我國在對紫外分光光度計波長準確度進行檢定時,很多 的生產(chǎn)廠一般都廣泛利用汞燈進行測試。具體的操作流程就 是:將原光源拆下來,采用標準燈,對標準光源燈各條的特 征譜線進行測試,波長準確度就是測量值和理論值做差。自 利用汞燈進行測試的過程中,能量測量作為測量的方式,波 段的范圍設(shè)置在245-560nm范圍之內(nèi),空氣作為樣品的參考 系,光譜帶的寬設(shè)置為2nm,再通過波長掃描。波長準確度 就是汞燈的各特征波長的測量值和其相應(yīng)的理論值之差。為 了確保準確度,可以重復(fù)進行3次,波長準確度就選擇3次 的平均值。
氖燈
在對紫外可見分光光度計的波長準確度進行檢測時,通 常人們在選用標準燈時用氖燈。在儀器紫外區(qū),由于氖燈的 連續(xù)光譜優(yōu)勢,就會在紫外區(qū)作為光源。在可見區(qū),由于光 譜中波長為656. 1nm和為486. 0nm是很容易分離的,而且具 有高的強度,譜線特征非常明顯,所以對儀器波長準確度進 行檢定時可以利用譜線。在我國,對于儀器進行計量檢定都 會用波長準確度較為高的標準燈-氖燈。
2.2波長重復(fù)性及其檢定方法
多次測試波長之后數(shù)據(jù)符合程度,也就是多次測試波長 的數(shù)據(jù)離散性就是波長的重復(fù)性 (WavelengthRepeatability)。檢定波長的重復(fù)性方法,操 作簡單。種方法,測試波長的準確度之后,測試三次取 平均值,波長重復(fù)性就是通過和3次測試中小值或者大 值做的差;第二種,測試波長的準確度,要經(jīng)過3次測試, 波長重復(fù)性就是大值與小值之差。
2.3光度準確度及其檢定方法
光度的實際測定值和理論值之差就是光度準確度 (PhotoMtricAccuracy)。它倆之間的差越小,測量就會更 準確,光度的準確度就會更高。一般,表示紫外可見分光光 度計光度的準確度有以下兩種方式:①透射比誤差或者透射 比準確度(TransmittanceAccuracy),表示用 TA (或AT); ②吸光度誤差(AbsorbanceError)或者是吸光度準確度 (Absorbd-nceAccuracy),在表示用 AA (或AA)時,要注 意測量時具體的吸光度情況。
3.紫外可見分光光度法的合理化運用 3.1溶液中物質(zhì)含量的測定
應(yīng)用紫外可見分光光度計測定標準溶液和未知液的吸 光度進而進行比較;也可先測出不同濃度標準液的吸光度, 繪制標準曲線,在一定濃度范圍內(nèi)標準曲線為直線,然后測 定出未知液吸光度,即可從標準曲線上查到其對應(yīng)濃度。
3.2化合物的鑒定
用不同波長的單色光分別通過某一濃度溶液,測定每一 種單色光的吸光度,之后分別以波長和分光度作為橫坐標和 縱坐標,繪制得到吸收光譜曲線。不同食品有其特定的吸收 光譜曲線,借此可以鑒定食品種類。紫外吸收光譜分析主要 用于已知物質(zhì)定量分析,測定化合物中含有微量的具有紫外 吸收的雜質(zhì)。
3.3反應(yīng)動力學(xué)研宄
借助于分光光度法可得出特定化學(xué)反應(yīng)速度常數(shù),借此 從兩個或兩個以上溫度條件下的速度數(shù)據(jù)得出反應(yīng)活化能。 3.4絡(luò)合物組成和穩(wěn)定常數(shù)的測定 金屬離子可與有機物形成絡(luò)合物且在紫外可見區(qū)有吸 收,據(jù)此可利用分光光度法來研宄其組成。
結(jié)語:總之,紫外可見分光光度法是利用物質(zhì)分子對紫 外可見光譜區(qū)的輻射的吸收來進行分析的一種儀器分析,這 種分子吸收光譜產(chǎn)生于價電子和分子軌道上的電子在電子 能級間的躍遷。朗伯-比耳定律是光吸收的基本定律,是分 光光度法定量分析的依據(jù)和基礎(chǔ)。紫外可見分光光度計在食 品檢驗中應(yīng)用廣泛,主要包括定量、定性和結(jié)構(gòu)分析以及反 應(yīng)動力學(xué)和溶液平衡研宄。
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